Роль проточной цитофлуориметрии лимфоузлов в дифференциальной диагностике реактивных лимфаденитов и лимфопролиферативных заболеваний

Показана актуальность исследования биоптатов лимфатических узлов методом проточной цитофлуориметрии для дифференциальной диагностики реактивных лимфаденитов и лимфопролиферативных заболеваний. Представлены результаты количественного исследования субпопуляций лимфоцитов при неходжкинских злокачественных лимфомах, лимфоме Ходжкина и реактивных лимфаденитах.

Ключевые слова: проточная цитофлуориметрия, лимфоузлы, лимфопролиферативные заболевания.

Одним из наиболее трудных разделов онкоморфологии остается дифференциальная диагностика лимфом, что обусловлено значительной гетерогенностью опухолей лимфоидной ткани, многообразием вариантов в пределах одной нозологической единицы, в ряде случаев морфологической близостью нормальных и опухолевых лимфоцитов, а также сходством гистологических проявлений злокачественных и реактивных процессов в лимфоузлах [1].

В настоящее время классификация лимфопролиферативных заболеваний невозможна без исследования иммунофенотипа опухолевых клеток. Иммунологические маркеры клеток можно исследовать методами иммуноцитохимии, иммуногистохимии, лазерной проточной цитометрией. Иммуно-гистохимия является обязательным компонентом исследования лимфоузлов в диагностике лимфом, однако, этот метод имеет ряд ограничений: невозможность количественного выражения экспрессии антигена, длительное время исследования, некоторая субъективность анализа, ограниченная воспроизводимость (факторы, влияющие на обработку образца) [2]. По данным работ ряда зарубежных исследователей проточная цитометрия тонкоигольного аспирата лимфоузла под УЗИ-контролем обладает достаточно высокой чувствительностью и специфичностью при диагностике неходжкинских лимфом, ниже диагностическая значимость при лимфоме Ходжкина и негематологических новообразованиях [2-7].

Целью исследования являлась разработка критериев дифференциальной диагностики реактивного лимфаденита, лимфомы Ходжкина и неходжкинских лимфом с использованием метода проточной цитофлуориметрии лимфоузлов.

Материалы и методика исследования

За период 2010-2011 гг. в гематологической лаборатории БУЗ УР «Первая республиканская клиническая больница МЗ УР» выполнено иммунофенотипирование лимфоузлов у 53 пациентов с лимфа-денопатией. Исследование проводили на 6-цветном проточном цитофлуориметре FACS CantoII c использованием широкой панели моноклональных антител производства BD. Биопсийный материал лимфатических узлов подвергали механической гомогенизации с последующим выделением клеточной суспензии опухолевых клеток. Концентрацию опухолевых клеток в суспензии доводили до 105-106 в мл, по 100 мкл суспензии вносили в пробирки, добавляли по 20 мкл меченых мышиных моноклональных антител. Инкубировали 15 мин. Ресуспензировали в 0,5 мл PBS, анализировали на проточном цитофлуориметре с помощью программы FACSDiva. Всем пациентам параллельно выполнялось цитологическое, гистологическое и иммуногистохимическое исследование биопсийного материала лимфоузлов.

Распределение пациентов по нозологическим формам представлено в таблице.

Среди пациентов с В-клеточными неходжкинскими лимфомами хронический лимфолейкоз / лимфома из малых лимфоцитов выявлена у 8 пациентов, лимфома зоны мантии у 3, В-пролимфо-цитарный лейкоз у 1, фолликулярная лимфома у 1, диффузная В-клеточная крупноклеточная лим-фома у 1 пациента. В анализ данных не включены 4 пациента 3 с негематологическими злокачественными новообразованиями и 1 с TNK-клеточной лимфомой из-за маленького объема выборки.

Распределение пациентов по нозологическим формам

Нозологическая форма

Количество пациентов

%

Реактивный лимфаденит

24

45,3

В-клеточные неходжкинские лимфомы

14

26,4

Лимфома Ходжкина

11

20,8

Негематологические злокачественные новообразования

3

5,7

Т-клеточные лимфомы

1

1,8

Всего:

53

100,0

Результаты и их обсуждение

Результаты распределения субпопуляций лимфоцитов в зависимости от нозологической формы представлены на рис. 1 и 2.

і Реактивный лісмфлдениі

(n=24)

В — клеточные неходжкинские лимф оыы (11= 14 )

і Лимфома Ходжкннл (и=11)

CD19(%) CD3{%) CD4(%>

Рис. 1. Процент содержания CD19+, CD3+ и CD4+ лимфоцитов при реактивных лимфаденитах, В-клеточных неходжкинских лимфомах и лимфоме Ходжкина

Как видно из рис. 1, наибольшее количество В-лимфоцитов (CD19+) выявлено при В-клеточных неходжкинских лимфомах (В-НХЛ), так как они и составляют субстрат опухоли. При реактивном лимфадените (РЛ) количество В-лимфоцитов в два раза меньше (р<0,001), а при лимфоме Ходжкина (ЛХ) в 5,5 раз меньше, чем при В-НХЛ(р<0,001).

14

I Реактивный лимфаденит (п=24)

В — клеточные нехо джктшские лимфомы (11=14 > і Лимфома Ходжкина (н=11)

CDS (%)

CD16+56(%)

CD4/CD8

Рис. 2. Процент содержания CD8+, CD16+56+лимфоцитов и значение иммунорегуляторного индекса CD4/CD8 при реактивных лимфаденитах, В-клеточных неходжкинских лимфомах и лимфоме

Ходжкина

них

Т-лимфоциты (CD3+) составляют основную массу клеток лимфоузла при ЛХ, причем 91,7 % из Т-хелперы (CD4+), что приводит к резкому увеличению иммунорегуляторного (CD4/CD8) индекса. Общее количество Т-лимфоцитов, количество Т-цитотоксических лимфоцитов (CD8+) и Т-хелперов в 2,74; 2,7 и 2,63 раза соответственно (р<0,001) выше при РЛ, чем при В-НХЛ, а иммунорегуляторный индекс примерно одинаковый (рис. 1 и 2).

Небольшой процент популяции лимфоцитов составляют NK-клетки, наименьшее их количество выявлено при В-НХЛ, хотя различия с РЛ и ЛХ недостоверны (рис. 2).

Таким образом, распределение субпопуляций лимфоцитов при проведении проточной цито-метрии лимфоузлов может быть использовано в дифференциальной диагностике РЛ, В-НХЛ и ЛХ. Необходимо дальнейшее исследование для разработки критериев диагностики видов В-НХЛ, различных клинико-морфологических вариантов ЛХ с помощью иммунофенотипирования лимфоузлов методом проточной цитофлуориметрии.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Криволапов Ю.А. Гистологическая и иммуногистохимическая дифференциальная диагностика неходжкин-ских лимфом: автореф. дис. … д-ра мед. наук. СПб., 2006. 24 с.

2. Colorado M., Cuadrado M.A., Insunza A. Simultaneous Cytomorphologic and Multiparametric Flow Cytometric Analysis on Lymph Node Samples Is Faster Than and as Valid as Histopathologic Study to Diagnose Most Non-Hodgkin Lymphomas // American Journal of Clinical Pathology. 2010. Vol. 133, №1. P. 83-91.

3. Savage E., Vanderheyden A.D., Bell M. Independent Diagnostic Accuracy of Flow Cytometry Obtained from Fine-needle Aspirates: A 10-year Experience with 451 Cases // American Journal of Clinical Pathology. 2011. Vol. 135. P. 304-309.

4. El-Sayed A., El-Borai M.H., Bahnassy A.A. Flow cytometricimmunophenotyping (FCI) of lymphoma: correlation with histopathology and immunohistochemistry // DiagnPathol. 2008. Vol. 3. P. 43-44.

5. Iancu D., Hao S., Lin P. Follicular lymphoma in staging bone marrow specimens: correlation of histologic findings with the results of flow cytometryimmunophenotypic analysis // Arch Pathol Lab Med. 2007. Vol. 131. P. 282-287.

6. Swart G.J. Fine needle aspiration biopsy and flow cytometry in the diagnosis of lymphoma // Transfus Apher Sci. 2007. №37. P. 71-79.

7. Jorgensen J.L. State of the art symposium: flow cytometry in the diagnosis of lymphoproliferative disorders by fine-needle aspiration. Cancer. 2005. №105. P. 443-451.

Поступила в редакцию 23.12.12

Т.й. Tolstolutskaya, A.N. Suvorov, V.G.Sergeev, E.F. Agletdinov

The role of flow cytometry lymph nodes in the differential diagnosis of reactive lymphadenitis and lymphoproliferative disorders

The article covers the issue of the urgency of biopsy specimens of lymph nodes by flow cytometry for the differential diagnosis of reactive lymphadenitis and lymphoproliferative disorders. We present the results for the quantitative research of lymphocyte subsets in non-Hodgkin’s malignant governmental lymphoma, Hodgkin’s lymphoma and reactive lymphadenitis.

Keywords: flow cytometry, lymph nodes, lymphoproliferative disease.

Tolstolutskaya T.O.,

candidate of medicine, asociate professor Izhevsk State Medical Academy 462034, Russia,

Материал взят из книги Биология. Наука о земле