НОСИТЕЛЬСТВО ВИРУСА ЭПШТЕЙНАБАРР И ОСОБЕННОСТИ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ИНФИЛЬТРАТА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЖЕЛУДКА О. В. Печенова

Научный руководитель: др мед. наук, проф. Р. И. Плешко

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

Введение. Вирус ЭпштейнаБарр широко распространен в челове ческой популяции. Как показали эпидемиологические исследования, ин фицированность ВЭБ детей до 5 лет в России составляет 50%, а взрос лых 80% [1]. В организме человека ВЭБ может существовать в двух формах: в виде носительства, которое определяется ПЦР – детекцией вирусной ДНК в крови, и в латентной форме, когда вирус встраивается в

геном клеток человека. В зараженной клетке реализуется лишь часть ге нетической информации ВЭБ, образования его потомства не происхо дит, однако при делении клетки вирусный геном воспроизводится и с хромосомами передается дочерним клеткам. В настоящее время отсут ствуют данные о роли вирусной инфекции, в частности, вируса Эпштей наБарр (ВЭБ) в патогенезе гастрита. Гастрит – одно из широко распро страненных заболеваний желудка в современном мире, встречающееся у 85% больных, которые жалуются на диспепсические расстройства. Воспаление слизистой оболочки (СО) желудка, как правило, развивается при условии снижения защитных цитопротективных свойств слизи. К этиологическим факторам гастрита относят Helicobacter pylori, курение и злоупотребление алкоголем, длительный стресс, рефлюкс желчи, хро нические инфекции, аутоиммунные заболевания и т. д.

Цель работы. Выявление особенностей воспалительного ин фильтрата в СО желудка у больных гастритами, ассоциированными с вирусом ЭпштейнаБарр.

Материал и методы. Было обследовано 2 группы больных. Первую группу включали пациенты, инфицированные ВЭБ, что подтверждалось ПЦРдетекцией (ВЭБпозитивный гастрит, n=10), у пациентов из второй группы фрагменты вирусной ДНК в крови не выявлялись (ВЭБнегативный гастрит, n=26). Все исследования проводились с информи рованного согласия пациентов. Было проведено фиброгастродуоденоскопическое исследование, в ходе которого взяты гастробиоптаты же лудка. На гистологических срезах, окрашенных гемотоксилинэозином, проводили подсчет общей клеточности и содержание отдельных кле точных элементов (плазмоциты, лимфоциты, эозинофилы, нейтрофилы, макрофаги) в 1 мм2 СО. Математическая обработка результатов прово дилась с помощью пакета программ SPSS v.11.5. Была произведена

описательная статистика малых выборок, с помощью подсчета Me и квартилей Q1, Q3. Различия между группами считались достоверными при уровне значимости р<0,05.

Результаты и обсуждение. В ходе исследования было установле но, что наибольшая клеточность воспалительного инфильтрата в СО

отмечалась в группе больных гастритом, ассоциированным с ВЭБ (Me=3399,58; 2615,904100,00), что значимо отличалось от значений в группе больных гастритом без вируса герпеса (Ме=1568,18; 1224,991708,88 в 1 мм 2). Это свидетельствует в пользу того, что при ВЭБ по зитивном гастрите более активно протекают воспалительные процессы, приобретающие лимфоплазмоцитарный характер. Выявлено увеличение количества плазмоцитов с существенным преобладанием их числа в группе ВЭБ – позитивных гастритов (Ме=1030,39; 866,541231,45 в 1 мм

2; Ме=318,00; 223,22406,92– при ВЭБнегативных гастритах). Плотность лимфоцитов в СО желудка при ВЭБносительстве было также выше

(Ме=1588,00; 1079,542227,27 в 1 мм 2). Более высокая плотность лим фоцитов и плазмоцитов может стать доказательством активации иммун ной системы при ВЭБ – инфекции, в большей степени, ее гуморально го звена. В то же время в группе ВЭБ позитивных гастритов отмечалось более высокое число макрофагов (Ме=69,00; 52,72100,00 в 1 мм 2; Ме=40,45; 24,3547,51 в 1 мм 2 – при ВЭБнегативных формах), что воз можно, связано с активацией миграции этих клеток. Исследования пока зали, что во всех гастробиоптатах присутствовала эозинофильная ин фильтрация. Она была более выражена в группе ВЭБпозитивных га стритов (Ме=309,67; 109,56318,75 в 1 мм 2 , Ме=141,76; 65,96176,43 в 1 мм 2 соответственно). Показательно, что при ВЭБинфекции отмечена более высокая плотность инфильтрации СО желудка нейтрофилами (Me=94,54; 61,94177,27); по сравнению с группой ВЭБ негативных га стритов: Me=59, 06 (36,3986,35).

Вывод: Таким образом, у больных ВЭБпозитивным гастритом вос палительные процессы протекают более активно и носят преимуще ственно лимфоплазмоцитарный характер. Полученные данные говорят о том, что существенную роль в развитии ВЭБпозитивного гастрита иг рают иммунные реакции, протекающие по гуморальному типу. Возмож но, вирусная персистенция способствует пролиферации лимфоцитов, что увеличивает их плотность во всех лимфопролиферативных органах, включая, лимфоидную ткань, ассоциированную со слизистыми оболоч ками. Полученные нами данные согласуются с сообщением Gregory C. e. a. [2] о способности ВЭБ повышать выживаемость Влимфоцитов и по давлять их гибель. При отсутствии адекватного контроля со стороны ос новных факторов противовирусного иммунитета (цитотоксические лим фоциты, NKклетки, Th1зависимые механизмы иммунного ответа) воз можна неконтролируемая пролиферация ВЭБ (+) Влимфоцитов [2].

Список литературы:

1. Аранкин Л. И., Залу Н. А./ / Ж. микробиол. – 1982. – Т.1,№1. – С. 2632.

2. Gregory C., Dive C., Henderson S. et al. // Nature. – 1991. – V. 349. – Р. 612.

ИЗМЕНЕНИЕ УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ CD3 И CD19 РЕЦЕПТОРОВ НА ПОВЕРХНОСТИ УФМОДИФИЦИРОВАННЫХ ЛИМФОЦИТОВ С. И. Позднякова, О. В. Земченкова

Научный руководитель: канд. биол. наук, доц. О. В. Башарина

Воронежский государственный университет, г. Воронеж

Введение. Одной из актуальных задач фотоиммунологии является выяснение механизмов терапевтического действия УФсвета. Ауто трансфузия УФоблученной крови (АУФОК) широко используется в раз личных областях клинической медицины. Установлено, что использова

ние этого метода для лечения широкого спектра заболеваний сопровож дается улучшением иммунологического статуса организма, которое мо жет быть следствием структурнофункциональных изменений иммуно компетентных клеток крови, индуцируемых при действии на нее УФ света в терапевтических дозах [1].

Процесс развития иммунного ответа организма на проникновение инфекции или какиелибо другие воздействия сопровождается значительными изменениями состава иммунокомпетентных клеток, в том чис ле происходит появление на клеточной поверхности определенных функциональных молекул – внутриклеточных маркеров [2, 3]. Модуляция экспрессии функционально значимых молекул является одним из эффективных механизмов иммунорегуляции в условиях воздействия УФизлучения.

Цель работы. В связи с вышесказанным целью работы явилось изучение влияния УФсвета на уровень экспрессии CD3 поверхностно го маркера Тлимфоцитов и CD19 – мембранного гликопротеида, прини мающего участие в регулировании развития Влимфоцитов, их актива ции и дифференцировки. Представлялось важным исследовать измене ние уровня экспрессии указанных маркеров на поверхности лимфоцитов в присутствии плазмы крови и циклогексимида в ходе суточной инкуба ции.

Материал и методы. Объект исследования – лимфоциты крови до норов. Выделение лимфоцитов из периферической крови доноров осу ществляли путем ее центрифугирования в градиенте плотности фиколл урографина (ρ=1,077 г/см3).

УФоблучение лимфоцитов (2∙106 клеток/мл) проводили при их непрерывном перемешивании магнитной мешалкой в термостатируемой кювете (20±1 ºС) с помощью ртутнокварцевой лампы типа ДРТ400 че рез светофильтр УФС1 с полосой пропускания 240−390 нм в течение 1 и 5 минут. Интенсивность облучения составила 151 Дж/(м2∙мин). Объем вносимого в кювету образца – 2 мл.

Нативные и облученные лимфоциты инкубировали в питательной среде RPMI1640 в отсутствие и в присутствии циклогексимида (104 моль/л) и в присутствии аутологично плазмы крови (18%) при темпера туре 37 ºС в атмосфере с [СО2] = 5 %.

Влияние УФизлучения на уровень экспрессии молекул рецепторного комплекса CD3 и CD19 на поверхности мембран Т и Влимфоцитов соответственно определяли с помощью метода проточной цитофлуори метрии. Измерения проводили на цитофлуориметре CyFLOW space

(Partec). Двойное окрашивание клеток проводили с использованием мо ноклональных антител CD3 (FITC), CD19 (PE; Beckman Coulter, USA).

Результаты и обсуждение. В результате проведенного исследова ния нами было выявлено незначительное снижение в ходе суточной ин

кубации (в отсутствие плазмы) уровня экспрессии как CD3, так и CD19 рецепторов. Это может быть обусловлено тем, что при отсутствии ро стовых факторов, содержащихся в плазме, синтез белка de novo не про исходит, поскольку уровень экспрессии изученных маркеров при инкуба ции лимфоцитов в присутствии циклогексимида такой же, как и при ин кубации клеток без него. При инкубации в присутствии плазмы уровень экспрессии CD3 и CD19 не отличается от значения данного параметра у нативных клеток непосредственно после выделения.

При воздействии УФсвета в дозе 151 Дж/м2 на лимфоциты проис ходит статистически достоверное понижение уровня экспрессии иссле дуемых маркеров в ходе суточной инкубации без плазмы по отношению

к таковому для нативных инкубированных клеток.

В ходе инкубации облученных клеток в присутствии плазмы наблю дается увеличение уровня экспрессии CD3 и CD19 рецепторов по сравнению с необлученными клетками после инкубации без плазмы. Установлено, что в присутствии циклогексимида происходит значительное (почти в два раза) снижение экспрессии CD3 и CD19 рецепторов по сравнению с данным параметром у интактных клеток. Следовательно, повышение уровня экспрессии CD3 и CD19 маркеров в облученных лимфоцитах связано с активацией синтеза данных белков в присутствии

аутологичной плазмы. Это может быть обусловлено тем, что при УФоблучении происходит образование АФК, которые вызывают переход транскрипционных факторов в активное состояние.

Выводы.

1. Было выявлено снижение уровня экспрессии CD3 и CD19 рецеп торов в ходе суточной инкубации лимфоцитов без плазмы. При инкубации в присутствии плазмы уровень экспрессии CD3 и CD19 не отличает ся от значения данного параметра у нативных клеток.

2. При воздействии УФсвета на лимфоциты в дозе 151 Дж/м2 проис ходит понижение уровня экспрессии CD3 и CD19 маркеров в ходе суточ ной инкубации без плазмы по сравнению с необлученными клетками.

3. В ходе инкубации облученных клеток в присутствии плазмы выяв лено увеличение уровня экспрессии CD3 и CD19 рецепторов по сравнению с инкубированными необлученными клетками.

4. Повышение уровня экспрессии маркеров CD3 и CD19 в облучен ных лимфоцитах при инкубации в присутствии плазмы обусловлено ак тивацией синтеза белков.

Список литературы:

1. Карандашов В. И. Фототерапия / В. И. Гольдштейн, Петухов Е. Б., Зродников В.

С. − М.: Медицина, 2001. − 392 с.

2. Ройт А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. – М.: Мир, 2000. – 581

с.

3. Фрейдлин И. С., Тотолян А. А. Клетки иммунной системы (IIIV). – СПб.: Наука,

2001. – 390 с.

Материал взят из: Медикобиологические науки: достижения и перспективы (г. Томск, 10-11 ноября 2011 г.): сборник материалов I Всероссийской научной студенческой конференции