МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ И МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОЗЁРНЫХ ЛЯГУШЕК (PELOPHYLAX RIDIBUNDUS) ИЗ ПЕНЗЕНСКОЙ ОБЛАСТИ

М. М. Закс, Н. В. Быстракова, О. А. Ермаков, С. В. Титов Пензенский государственный университет, Пенза, Россия zaks. pnz@gmail. com

MOLECULAR GENETIC AND MORPHOLOGICAL CHARACTERISTICS

OF MARSH FROGS (PELOPHYLAX RIDIBUNDUS) FROM THE PENZA REGION

M. M. Zaks, N. V. Bystrakova, O. A. Ermakov, S. V. Titov

Penza State University, Penza, Russia

Исследования последнего десятилетия показали, что под названием озерная ля — гушка (Pelophylax ridibundus) скрываются несколько морфологически сходных видов. На территории нашей страны они изучены недостаточно, но по ряду различий среди них были выделены две формы – «западная» и «восточная» (Боркин и др., 2004). Моле — кулярно-генетические данные об обитании этих форм на территории России до насто — ящего времени ограничивались одной работой (Plötner et al., 2010), в которой показано, что «восточная» форма («P. cf. bedriagae»), за исключением случаев непреднамеренной интродукции, распространена до линии Волгоград–Уральск–Орск, а северо-западнее обитает «западная» форма (P. ridibundus).

На территории Пензенской области нами были обнаружены межпопуляционные отличия озерных лягушек по морфологическим и биоакустическим признакам (Закс,

2012; Ермаков и Закс, 2012), что позволило предположить обитание здесь двух разных форм этого вида. Предлагаемое сообщение посвящено молекулярно-генетической диа — гностике этих форм по данным анализа митохондриальной и ядерной ДНК (далее – мт — и яДНК) и поиску морфологических различий между ними.

Всего проанализированы 100 экз. озерной лягушки из 15 географических пунктов

Пензенской области.

Молекулярно-генетический анализ. В качестве образцов тканей для выделения ДНК использовалась часть пальца передней конечности амфибий, взятая прижизненно и зафиксированная в 96% этаноле. ДНК выделяли по стандартной методике, включаю — щей обработку додецилсульфатом натрия (SDS) и протеиназой К при 50°C с последу — ющими фенольно-хлороформной очисткой и осаждением охлажденным абсолютным этиловым спиртом в сильно солевой среде (Sambrook et al., 1989).

Использовали 2 молекулярно-генетических маркера: для мтДНК – фрагмент пер-вой субъединицы гена цитохром оксидазы (COI, «DNA barcoding»), для яДНК – интрон

1 гена сывороточного альбумина (SAI-1) (Plötner et al., 2009). В первом случае при по — мощи универсальных праймеров (Ivanova et al., 2007) амплифицировался фрагмент гена COI, методом секвенирования определялась его первичная структура, а затем по видо — специфичным заменам проводился скрининговый рестрикционный анализ, позволяю — щий определять принадлежность гаплотипов мтДНК к «восточной» или «западной» форме (Ермаков и др., в печати). Во втором случае, использовались праймеры из выше — указанной работы (Plötner et al., 2009), а видоспецифичные замены для рестрикционной диагностики форм определялись по первичной структуре интрона 1 гена SA экземпля — ров P. ridibundus и P. cf. bedriagae (Plötner et al., 2012) из базы данных GenBank NCBI.

PCR-реакцию проводили в стандартной реакционной смеси в течение 30 циклов в обобщенном режиме: 94° С – 1 мин, 60° С – 1 мин, 72° С – 1 мин. Секвенирование про — водили на автоматическом секвенаторе ABI 3500 бург, Россия 25–27 ноября 2013 г.