ИССЛЕДОВАНИЕ ИЗМЕНЕНИЙ ПАРАМЕТРОВ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ КРОВИ И ПЕРИТОНЕАЛЬНОГО ЭКССУДАТА МЫШЕЙ НА РАЗЛИЧНЫХ СТАДИЯХ РАЗВИТИЯ АСЦИТНОЙ КАРЦИНОМЫ ЭРЛИХА

Д. И. Шабанов

Научный руководитель: канд. биол. наук, асс. Ю. А. Лысенко

Воронежский государственный университет, г. Воронеж

Введение. Многочисленные экспериментальные данные свиде тельствуют о неоднозначной роли системы иммунитета, в частности по лиморфноядерных гранулоцитов, макрофагов и моноцитов, в развитии опухоли [2]. Обнаружены проявления как противоопухолевой, так и про опухолевой активности компонентов иммунной системы, однако меха низмы таких эффектов изучены не достаточно подробно. Исследование кривых хемилюминесценции крови и суспензии клеток перитонеального экссудата позволит оценить вклад фагоцитов в противоопухолевую ак тивность иммунокомпетентных клеток [1].

Цель работы. Исследование изменений параметров стимулиро ванной латексом люминолзависимой хемилюминесценции фагоцитирующих клеток крови и перитонеального экссудата мышей с асцитной кар циномой Эрлиха (АКЭ) на различных стадиях развития опухоли.

Материал и методы. В качестве объектов исследования использовали образцы периферической крови и перитонеального экссудата мы шейсамцов аутбредного стока NMRI в возрасте 2—3 мес. Суспензию

клеток асцитной карциномы Эрлиха перевивали интраперитонеально на стадии экспоненциального роста опухоли (7е сут). Общую концентра цию лейкоцитов определяли с помощью камеры Горяева. Дифференци альный подсчет лейкоцитарных клеток осуществляли после окраски вы сушенных мазков по методу Романовского—Гимза с использованием микроскопа Микмед1. Интегральную интенсивность стимулированной латексом люминолзависимой хемилюминесценции регистрировали с помощью биохемилюминометра БХЛ07 (Россия) в течение 30 мин. Об работку экспериментальных данных осуществляли с помощью програм мы «Люм1». Концентрация клеток в исследуемых образцах составляла

4106 кл./мл.

Результаты и обсуждение. Нами зарегистрированы кривые хеми люминесценции крови здоровых мышей и животных на седьмые сутки развития АКЭ. Выявлено, что кривые хемилюминесценции крови харак теризуются двумя пиками свечения. Максимальная интенсивность вто рого пика люминесценции (95,4±38,4 с) здоровых животных составила

17,5±2,8 отн. ед. На 7сут развития опухоли значение данного показате ля возрастало до 34,0±13,3 отн. ед. При этом происходило также увели чение времени регистрации максимального свечения на 415 с по срав нению со значением контрольного образца.

Нами зарегистрированы значения интенсивности пиков хемилюминесценции клеток перитонеального экссудата на различных стадиях развития АКЭ. Кривые хемилюминесценции перитонеального экссудата отличались от таковых крови мышей наличием лишь одного максимума свечения. В суспензии клеток перитонеального смыва здоровых живот ных интенсивность свечения составила 9,0±2,4 отн. ед.; на 2е, 7е, 8е и

13 сут после имплантации АКЭ – 45,0±15,2; 77,0±12,5; 22,5±10,3 и

23,5±4,9 отн. ед. соответственно, а время достижения максимального значения интенсивности хемилюминесценции – 429,0±94,2; 454,0±76,7;

322,2±168,2 и 170,0±95,69 с соответственно.

Также нами исследованы изменения процентного соотношения кле точных популяций перитонеального экссудата в ходе пролиферации асцитной карциномы Эрлиха. У здоровых мышей в образцах перитонеаль ного смыва выявлялось 65 % лимфоцитов, 10 % нейтрофилов, 18 %

макрофагов, 5 % эритроцитов и 2 % клеток мезотелия. На вторые сутки после имплантации АКЭ доля лимфоцитов увеличилась до 70 %, а со держание нейтрофилов и макрофагов снизилось до 5 %. При этом клет ки карциномы составляли 20 % от общего числа клеток. На 7е сут раз вития АКЭ в клеточной популяции доминировали клетки опухоли (76 %), также в одинаковой пропорции наблюдались лимфоцитарные клетки и нейтрофилы. На 8е сут развития опухоли выявлялись следующие клеточные популяции: лимфоциты (10 %), нейтрофилы (3 %), клетки карци номы (82 %), макрофаги (3 %), эритроциты (2 %). Терминальная стадия

развития АКЭ характеризовалась наличием помимо вышеуказанных ти пов клеток существенного (10 %) числа эритроцитов.

Выводы:

1. Кривая люминолзависимой хемилюминесценции крови здоровых мышей и животных с асцитной карциномой Эрлиха характеризуется двумя максимумами интенсивности хемилюминесценции.

2. На 7 сутки развития АКЭ наблюдается увеличение времени достижения максимальной интенсивности второго пика свечения, что мо жет быть вызвано модулирующим действием развивающейся опухоли на функциональные свойства нейтрофильных лейкоцитов. При этом в перитонеальном экссудате обнаруживается равное процентное соотно шение нейтрофилов и лимфоцитов, в то время как на начальных стади ях развития опухоли (2 сут) в суспензии доминируют лимфоцитарные клетки.

3. Максимальное значение интенсивности вспышки хемилюминес ценции в образце перитонеального экссудата наблюдается на 7е сутки развития АКЭ. К 13м сут пролиферации опухоли происходит уменьше ние лагпериода развития хемилюминесцентного ответа фагоцитирую щих клеток.

Таким образом, экспериментальные данные демонстрируют модулирующее действие опухоли по отношению к клеткам иммунной систе мы мышей, что согласуется с литературными данными [3]. На начальных стадиях развития опухоли наблюдается активация защитных реакций, о чѐм свидетельствует повышение максимальной интенсивности люми несценции фагоцитов к 7м суткам развития неоплазмы как в крови жи вотных, так и в перитонеальном экссудате. На более поздних стадиях развития АКЭ клетки опухоли, по всей видимости, оказывают угнетаю щее действие на функциональные свойства фагоцитирующих лейкоци тов, что выражается в снижении уровня генерации ими активных форм кислорода.

Список литературы:

1. Владимиров Ю. А. Свободные радикалы и клеточная хемилюминесценция / Ю. А. Владимиров, Е. В. Проскурина // Успехи биологической химии. – 2009. – Т.

49. – С. 341–388.

2. Мальцева В. Н. Неоднозначность нейтрофила в генезе опухоли / В. Н. Мальцева, В. Г. Сафронова // Цитология. – 2009. – Т 51, № 6. – С. 469–474.

3. Пальцев М. А. Межклеточные взаимодействия // М. А. Пальцев. – М. : Медицина,

1995. – 224 с.