ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСПРЕССИИ МРНК ИЛ8 И ИЛ6 ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК В ОТВЕТ НА СТИМУЛЯЦИЮ АДЕНОЗИНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ НЕГИДРОЛИЗУЕМЫМ АНАЛОГОМ АДЕНОЗИНА У БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ

Н. С. Фаттахов1, С. В. Рыжов2, К. С. Юрьева2, К. В. Горемыкин2,

Е. В. Короткая2, И. В. Салтыкова2, О. С. Федорова2, Е. Э. Кремер2

Научный руководитель: др мед. наук, гл. науч. сотр. А. Э. Сазонов

1Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

2ЦНИЛ СибГМУ, г. Томск

Введение. Исследования последних лет свидетельствуют о веду щей роли дендритных клеток в генерации первичного иммунного ответа

при бронхиальной астме и развитии легочного воспаления. В дендрит ных клетках, полученных из моноцитов, аденозин способствует продук ции цитокинов острой фазы воспаления, таких как интерлейкин 6 (ИЛ6) и интерлейкин 8 (ИЛ8), которые, в зависимости от места и характера воспалительного процесса, либо усугубляют его развитие, либо, наобо рот, снижают интенсивность воспалительных реакций. Однако же, роль аденозина в регуляции экспрессии мРНК этих цитокинов в моноцитах остается невыясненной. Изучение эффектов стимуляции АР в ходе ак тивации моноцитов способствует пониманию молекулярных механизмов развития воспаления.

Цель работы. Изучить эффекты стимуляции аденозиновых рецеп торов моноцитов в регуляции экспрессии мРНК интерлейкинов ИЛ6 и

ИЛ8 у больных бронхиальной астмой.

Материал и методы. Исследование было проведено на моноцитах, полученных из венозной крови 37 больных бронхиальной астмой и 15 здоровых лиц. Для стимуляции аденозиновых рецепторов использовали негидролизуемый аналог аденозина – Nэтилкарбоксамидоаденозин (NECA) в концентрации 30 мкМ, время инкубации моноцитов в присут ствии NECA составило 38 часов. Выделение моноцитов из мононукле арной фракции проводили с использованием двойного градиента плот ности перколла (1,130 г/мл, pH 8,5 – 9,5, 25оС) («Sigma», США). Моноци ты, собранные с раздела фаз, использовали для приготовления суспен зии с концентрацией моноцитов 5 x 105 клеток/мл. Суспензию готовили на основе среды RPMI1640. Выделение общей РНК из моноцитов про водили с применением набора для выделения общей РНК «Qiagen RNeasy Mini kit» («Qiagen», США). Синтез комплементарной ДНК (кДНК) проводили при помощи набора реактивов «Promega» (США) на ДНК амплификаторе («Applied Biosystems», США. Полимеразную цепную ре акцию в реальном времени проводили на детектирующем термоциклере ДТ96 («ДНКТехнология», Россия). Пары праймеров были взяты либо из ранее опубликованных работ, либо подобраны специально с помощью программы Primer 3, находящейся в свободном доступе в сети интернет (http://frodo. wi. mit. edu/).

Результаты и обсуждение. Был обнаружен повышенный базаль ный уровень экспрессии (без стимуляции аденозиновых рецепторов NECA) у больных бронхиальной астмой ИЛ6 и ИЛ8 по сравнению со здоровыми донорами. Было выявлено увеличение экспрессии мРНК ИЛ8 у больных бронхиальной астмой при инкубации с NECA (с 9,492%

(1,61134,317% (Me(Q1Q3)) до 17,964% (2,01167,342%(Me(Q1Q3)) от

уровня экспрессии актина, p<0,05), а также повышение экспрессии мРНК ИЛ6 (с 0,197%(0,0260,891% (Me(Q1Q3)) до 0,634% (0,0681,708%(Me(Q1Q3)) от уровня экспрессии актина, p<0,01) под действи ем NECA. Повышенные показатели экспрессии исследуемых цитокинов

у больных бронхиальной астмой, свидетельствуют о протекании хрони ческих воспалительных процессов.

Вывод: Принимая во внимание важную роль паракринной функции моноцитов в регуляции воспаления, необходимо дальнейшее использо вание описанного нами подхода для изучения роли аденозина и адено зиновых рецепторов в различных патофизиологических процессах.

Список литературы:

1. Novitskiy S. V., Ryzhov S., Zaynagetdinov R. Adenosine receptors in regulation of dendritic cell differentiation and function // Blood. – 2008. – Vоl. 112, № 5. – P. 18221831

Материал взят из: Медикобиологические науки: достижения и перспективы (г. Томск, 10-11 ноября 2011 г.): сборник материалов I Всероссийской научной студенческой конференции