ДИНАМИКА КИСЛОЙ ФОСФАТАЗЫ ГРАНУЛОЦИТОВ ПРИ ДВС-СИНДРОМЕ

Известно, что гранулоциты, как и другие форменные элементы крови, содержат в своих гранулах факторы свертывания и фибринолиза [1, с. 320]. В отличие от эритроцитарных и тромбоцитарных факторов, лейкоцитарные факторы изучены недостаточно [2, с. 35 – 39; 3, с. 38;

4, с. 36 – 37]. Однако установлено, что они могут принимать участие в продукции витамин К-зависимых факторов свертывания, в частности II, VII, IX и X. А эти факторы, как известно, играют значительную роль в возникновении и развитии диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови (ДВС-синдрома) [5, с. 362; 6, с. 212 – 217; 7, с. 352 – 355].

Также известно, что гранулоциты поддерживают кровь в жидком состоянии, выделяя гепарин, плазминоген, проактиватор и активаторы фибринолиза. Предполагают, что фибринолитическая активность гранулоцитов в физиологических условиях и при патологии может быть связана с наличием в их гранулах щелочной и кислой фосфатаз, способных переводить плазминоген в плазмин. Кроме того, кислая фосфатаза является маркерным ферментом гранулоцитов, определяющим степень их активности [8, с. 208 – 215; 9, с. 70 – 73;

10, с. 63 – 64].

Таким образом, роль гранулоцитов в реализации гемостаза не ограничивается вышеперечисленными процессами, однако более глубокое выяснение их роли в гемостазе является предметом дальнейших научных изысканий [11, с. 292; 12, с. 5 – 14; 13, с. 35 – 57; 14, с. 52 – 71].

Исходя из вышеизложенного, целью нашего исследования было отследить динамику кислой фосфатазы как маркерного фермента гранулоцитов при ДВС-синдроме.

Эксперименты проводились на 15 кроликах обоих полов массой

2,5 – 3,0 кг. ДВС-синдром моделировали препаратом «Эфа-2», который вводили натощак перорально в дозе 8330 мг/кг [15, с. 132 – 138].

Синдром ДВС диагностировали по времени рекальцификации плазмы, по тромбиновому времени, по содержанию фибриногена, по активности XIII фактора, по этаноловому и протаминсульфатному тестам [16, с. 34, 56, 110 – 115; 17, с. 67 – 73].

Динамику маркерного фермента кислой фосфатазы в сыворотке крови изучали по методу Боданского [18, с. 652], принцип которого

основан на способности фермента осуществлять гидролиз β-глицерофосфата натрия с освобождением неорганического фосфора, количество которого определяли на фотоэлектрическом концентрационном колориметре. По количеству освободившегося фосфора рассчитывали активность кислой фосфатазы в сыворотке крови. Результат выражали в единицах Боданского (ВЕ).

Активность в плазме факторов гранулоцитов определяется степенью уменьшения числа их гранул. Гранулы подсчитывали с помощью лизосомально-катионного теста по методу В. Е. Пигаревского (1978) [19, с. 86], используя световой микроскоп при увеличении ок. 15, об. 90. Для изучения содержания гранул в гранулоцитах мазки крови окрашивали красителем Май-Грюнвальда. При микроскопии гранулы дифференцируются как крупные округлые образования розового цвета. Подсчитывали 100 гранулоцитов и идентифицировали среди них три группы: 1) гранулоциты, содержащие более 30 гранул; 2) гранулоциты, содержащие до 10 гранул; 3) гранулоциты, содержащие менее

10 гранул. Результат выражали в процентах [20, с. 86 – 88, 123, 125, 129,

209].

Забор крови производили до моделирования ДВС-синдрома и с первых суток после введения препарата «Эфа-2» до восстановления изучаемых показателей.

Полученные данные обработаны статистически на компьютере методом прямых разниц [21, с. 119].

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что у кроликов после введения препарата «Эфа-2» развивался ДВС-синдром (см. табл. 1). Стадия гиперкоагуляции длилась в среднем

4 суток и переходила в фазу коагулопатии потребления. Переходная стадия длилась в течение 4 суток, после чего развивалась гипокоагуляция в течение 6 суток. Восстановление показателей происходило в среднем на 19 – 20-е сутки после введения «Эфы-2».

Стадия гиперкоагуляции характеризовалась резким укорочением

времени рекальцификации плазмы и тромбинового времени, увеличением содержания фибриногена и активности XIII фактора, а также определялись положительные пробы этанолового и протаминсульфатного тестов.

В последующие дни эксперимента активность факторов свертывающей системы постепенно уменьшалась и развивалась глубокая гипокоагуляция вплоть до полной несвертываемости крови с наиболее выраженными нарушениями на 10 – 11-е сутки.

Полученные данные согласуются с исследованиями

ДВС-синдрома другими авторами [22, с. 160; 23, с. 37 – 41; 24, с. 58;

25, с. 71 – 76].

Показатели, характеризующие динамику кислой фосфатазы и активность гранулоцитов при развитии в организме животных ДВС-синдрома, представлены в таблице 2.

Изменение показателей системы гемостаза при развитии ДВС-синдрома (М ± m)

Таблица 1

Показатели Исход

Время

Время после введения препарата «Эфа-2» (сут.)

1. Гиперкоагуляция 2. Коагулопатия потребления 3. Гипокоагуляция

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 19

рекальцификации плазмы (сек)

Тромбиновое время (сек)

Фибриноген

(мг%)

Активность фактора XIII (%)

78,7 ±

2,64

16,5 ±

1,11

58,2 ±

2,21

100,0 ±

1,75

–38,5 ±

3,93

–5,6 ±

0,58

+28,0 ±

13,26*

+71,0 ±

1,25

–40,9 ±

4,20

–4,9 ±

0,87

+31,7 ±

8,54

+72,0 ±

3,85

–37,8 ±

8,87

–3,0 ±

0,75

+24,0 ±

7,37

+56,0 ±

4,76

–22,5 ±

9,40

–3,5 ±

0,62

+11,2 ±

0,94

+47,5 ±

5,64

–2,0 ±

5,18*

+0,4 ±

0,43*

–22,9 ±

5,52

+5,4 ±

2,61*

+5,0 ±

4,76*

+1,2 ±

0,67*

–26,8 ±

5,81

–4,7 ±

4,34*

+13,6 ±

5,93

+1,5 ±

0,50

–33,5 ±

5,43

–12,3 ±

2,54

+17,3 ±

3,97

+2,8 ±

0,36

–39,1 ±

5,43

–20,6 ±

2,13

+148,3 ±

22,67

+7,3 ±

1,79

–44,8 ±

7,49

–65,9 ±

4,40

+166,3 ±

22,94

+11.6 ±

1,48

–46,8 ±

9,57

–69,1 ±

4,78

+206,7 ±

16,91

+15,6 ±

2,42

–52,6 ±

6,25

–76,7 ±

3,52

+110,0 ±

13,50

+12,5 ±

2,71

–40,6 ±

6,79

–63,4 ±

5,23

+56,8 ±

12,20

+6,2 ±

0,13

–35,8 ±

11,25

–49,3 ±

3,46

+47,3 ±

15,63

+3,4 ±

1,21

–34,1 ±

11,90

–40,7 ±

3,46

+6,3 ±

5,71*

+0,2 ±

1,20*

–2,2 ±

3,25*

–5,7 ±

4,28*

Этаноловый тест «0» «1» «1» «1» «1» «1» «1» «1» «1» «0» «0» «0» «0» «0» «0» «0» ПДФ

с протамин-сульфатом

«0» «1» «1» «1» «1» «1» «1» «1» «1» «0» «0» «0» «0» «0» «0» «0»

Примечание: * – Р > 0,05

Примечание: * – Р > 0,05

Динамика кислой фосфатазы и активность гранулоцитов при ДВС-синдроме (М ± m)

Таблица 2

l-character:line-break;mso-column-break-before: always’>

–35,8±

5,11

–40,2 ±

2,40

–40,2 ±

2,01

–38,6 ±

1,17

–40,8 ±

1,99

–51,9 ±

1,79

–57,0 ±

2,65

–60,5 ±

4,37

–58,1 ±

2,93

–56,5 ±

5,88

–49,3 ±

1,56

–8,6 ±

5,29

Р < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 > 0,1

… до 10 гранул,

%

0 +17,5 ±

1,04

+22,3 ±

2,36

+26,3 ±

2,53

+24,2 ±

5,11

+19,5 ±

1,23

+16,0 ±

1,04

+13,2 ±

1,18

+10,3 ±

0,25

+21,3 ±

1,03

+14,2 ±

1,01

+9,1 ±

1,06

+9,6 ±

0,37

+9,3 ±

0,37

+7,6 ±

0,43

+3,1 ±

2,51

Р < 0,001 < 0,001 < 0,001

+16,0 ±

1,04

+13,2 ±

1,18

+10,3 ±

0,25

+21,3 ±

1,03

+14,2 ±

1,01

+9,1 ±

1,06

+9,6 ±

0,37

+9,3 ±

0,37

+7,6 ±

0,43

+3,1 ±

2,51

Р < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 > 0,2

… менее

10 гранул, %

0 +6,7 ±

0,72

+10,5 ±

0,56

+12,1 ±

1,29

+15,6 ±

1,45

+21,2 ±

1,56

+27,4 ±

1,53

+26,5 ±

1,65

Кислая фосфатаза (ВЕ)

+0,22 ±

0 0,05

+0,36 ±

0,07

+0,48 ±

0,12

+0,51 ±

0,11

+0,38 ±

0,09

+0,42 ±

0,11

+0,50 ±

0,12

+0,54 ±

0,12

+0,58 ±

0,14

+0,62 ±

0,15

+0,84 ±

0,18

+0,54 ±

0,19

+0,44 ±

0,11

+0,31 ±

0,10

+0,07 ±

0,06

Р < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,01 < 0,001 < 0,01 > 0,2

Судя по представленным данным, следует, что в течение всего срока эксперимента в сыворотке крови кроликов наблюдалось повышение активности маркерного фермента гранулоцитов – кислой фосфатазы. Максимальная активность фермента определялась на 11-е сутки исследований. Начиная с 14-х суток происходило уменьшение активности кислой фосфатазы, и на 19-е сутки эксперимента кислая фосфатаза в сыворотке крови не определялась.

Исследование активности гранулоцитов показало повышение их количества в крови кроликов во все сроки эксперимента. В стадию гиперкоагуляции на 5 – 6-е сутки степень увеличения гранулоцитов была минимальной. В стадию гипокоагуляции, на 10 – 11-е сутки, определялись максимальные значения абсолютного числа гранулоцитов, что указывало на развитие нейтрофильного лейкоцитоза, т. к. их число в этот период увеличивалось на 53% по сравнению с исходными данными. Начиная с 12-х суток степень увеличения гранулоцитов в крови кроликов снижалась, и на 19-е сутки их количество возвращалось к исходному уровню.

Если до введения препарата «Эфа-2» практически 100% гранулоцитов содержали более 30 гранул, то после его введения, во все сроки развития экспериментального ДВС-синдрома, увеличивалось относительное число дегранулированных клеток. Самая высокая степень увеличения относительного числа исследуемого показателя фиксировалась на 11 – 12-е сутки эксперимента, что по времени соответствовало развитию стадии гипокоагуляции, где наблюдалось 63% дегранулированных форм.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что повышение активности кислой фосфатазы в сыворотке крови кроликов соответствовало изменениям содержания относительного числа дегранулированных гранулоцитов. При этом повышение динамики кислой фосфатазы и активности гранулоцитов в крови кроликов соответствовало степени тяжести протекания ДВС-синдрома и достигало максимальных значений в стадию гипокоагуляции.

Таким образом, увеличение содержания кислой фосфатазы в крови в динамике ДВС-синдрома может свидетельствовать о возможном участии активированных гранулоцитов в патогенезе гемостаза при ДВС-синдроме.

Список использованной литературы

1. Кузник Б. И. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая

резистентность организма / Б. И. Кузник, Н. В. Васильев, H. H. Цыбиков. – М. : Медицина, 1989. – 320 с. 2. Баркаган З. С. Оценка степени повреждения эритроцитов при диссеминированном внутрисосудистом свертывании крови / З. С. Баркаган, И. В. Тамарин //

Лаб. дело. – 1988. – № 4. – С. 35 – 39. 3. Ермолаева Т. А. Функционально-биохимические характеристики кровяных пластинок в норме и при тромбоцитопатиях : автореф. дис. на соиск. уч. степ. д-ра. мед. наук : спец. 14.00.29 «Гематология и переливание крови» / Т. А. Ермолаева. – СПб., 1992. – 71 с. 4. Кисилев C. B. Взаимодействие протромбина с эритроцитами и альвеолярными макрофагами / C. B. Кисилев, А. И. Хайрутдинова, Д. М. Зубаиров // Гематология и трансфузиология. – 1993. – № 7. – С. 36 – 37. 5. Зубаиров Д. М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбообразования / Д. М. Зубаиров. – Казань : ФЭН, 2000. – 362 с. 6. Levi M. Disseminated Intravascular Coagulation / M. Levi // Transfusion Alternatives in Transfusion Medicine. – 2003. – Vol. 4, No. 6. – P. 212 – 217. 7. Hambleton J. Coagulation: consultative hemostasis / J. Hambleton, L. L. Leung, M. Levi // Hematology (Amer. Soc. Hematol. Edus. Program). – 2002. – P. 352 – 355.

8. Schmitt B. P. Heparin-associated thrombocytopenia: a critical review and pooled analysis / B. P. Schmitt, B. Adelman // Amer. J. Med. Sci. 2003. – Vol. 305. – P. 208 – 215. 9. Анохина Т. Ю. Совершенствование методов контроля за эффективностью антикоагулянтной терапии ДВС-синдрома у детей / Т. Ю. Анохина, О. Н. Соловьев, С. А. Лоскутова // Тромбоз, гемостаз и реология. – 2002. – № 2 (10). – С. 70 – 73. 10. Сороцкая В. Н. Геморрагический васкулит токсико-аллергического генеза, осложненный острым ДВС-синдромом и гематологическими нарушениями (анемия, лейкопения) / В. Н. Сороцкая, Т. С. Сальникова // Вестн. нов. мед. технологий. – 2000. – Т. 7, № 1. – С. 63 – 64. 11. Баркаган З. С. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза / З. С. Баркаган. – М. : Ньюдиамед, 2008. – 292 с. 12. Баркаган З. С. Современные аспекты патогенеза, диагностики и терапии ДВС-синдрома / З. С. Баркаган, А. П. Момот // Вестн. гематологии. –

2005. – Т. 1, № 2. – С. 5 – 14. 13. Макаров В. А. Разработка новых методов диагностики и лечения нарушений гемостаза / В. А. Макаров // Проблемы физиологии и патологии системы гемостаза. – Барнаул,

2000. – С. 35 – 57. 14. Папаян Л. П. Синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови: трагический срыв системы гемостаза / Л. П. Папаян, Б. А. Барышев // Трансфузиология. – 2001. –

№ 2. – С. 52 – 71. 15. Боярчук Е. Д. Экспериментальная модель

ДВС-синдрома / Е. Д. Боярчук // Вестн. проблем биологии и медицины. –

1998. – № 7. – С. 132 – 138. 16. Лабораторные методы исследования системы гемостаза / В. П. Балуда, З. С. Баркаган, Е. Д. Гольдберг и др. ; под ред. Е. Д. Гольдберга. – Томск, 1980. – 314 с. 17. Лабораторна діагностика стану системи гемостазу / Т. М. Платонова, Т. М. Чернишенко, О. В. Горницька та ін. // Укр. біохім. журн. – 2000. – Т. 72, № 6. – С. 67 – 73. 18. Покровский А. А. Биохимические методы исследования в клинике / А. А. Покровский. – М. : Медицина, 1969. –

В. Е. Пигаревский // Патол. физиология и эксперим. терапия. – 1975. –

№ 3. – С. 86 – 88. 20. Лабораторные методы исследования в клинике :

справочник / под ред. В. В. Меньшикова. – М. : Медицина, 1987. – 364 с.

21. Каминский Л. C. Статистическая обработка лабораторных и клинических данных / Л. C. Каминский. – М. : Медицина, 1986. – 119 с.

22. Лычев В. Г. Диагностика и лечение диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови : монография / В. Г. Лычев. – М. : Медицина, 1993. – 160 с. 23. Бокарев И. Н. Постоянное и диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови / И. Н. Бокарев // Клин. медицина. – 2000. – Т. 78, № 8. – С. 37 – 41.

24. Цвирко Д. Г. Алгоритм диагностики и терапии диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови / Д. Г. Цвирко // Пробл. гематологии и переливания крови. – 2005. – № 3. – С. 58.

25. Заболотских И. Б. Синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови: диагностика и интенсивная терапия / И. Б. Заболотских, С. В. Синьков, Л. Е. Аверьянова // Анестезиология и реаниматология. – 2007. – № 2. – С. 71 – 76.

Динаміка кислої фосфатази гранулоцитів при ДВЗ-синдромі

Результати досліджень свідчать про те, що підвищення

активності кислої фосфатази в сироватці крові відповідало змінам вмісту відносного числа дегранульованих гранулоцитів. При цьому підвищення динаміки кислої фосфатази та активності гранулоцитів в крові відповідало ступеню тяжкості протікання ДВЗ-синдрому та досягало максимальних значень в стадію гіпокоагуляції.

Таким чином, збільшення вмісту кислої фосфатази у крові в динаміці ДВЗ-синдрому може вказувати на можливу участь активованих гранулоцитів у патогенезі гемостазу при ДВЗ-синдромі.

Ключові слова: кисла фосфатаза, ДВЗ-синдром, гранулоцити, гемостаз.

Боярчук Е. Д. Динамика кислой фосфатазы гранулоцитов при ДВС-синдроме

Результаты исследований свидетельствуют о том, что

повышение активности кислой фосфатазы в сыворотке крови соответствовало изменениям содержания относительного числа дегранулированных гранулоцитов. При этом повышение динамики кислой фосфатазы и активности гранулоцитов в крови соответствовало степени тяжести протекания ДВС-синдрома и достигало максимальных значений в стадию гипокоагуляции.

Таким образом, увеличение содержания кислой фосфатазы в крови в динамике ДВС-синдрома может указывать на возможное участие активированных гранулоцитов в патогенезе гемостаза при ДВС-синдроме.

Ключевые слова: кислая фосфатаза, ДВС-синдром, гранулоциты, гемостаз.

in DIC

Boyarchuk E. D. Dynamics Acid Phosphatase Granulocytes

It is known that granulocytes, as well as other blood cells contain

granules in their coagulation factors and fibrinolysis, in particular II, VII, IX and X. And these factors play a significant role in the origin and development of DIC.

It is also known that the granulocyte marker enzyme, determining the degree of activity is acid phosphatase.

The aim of our study was to track the dynamics of acid phosphatase, a marker enzyme of granulocytes, with DIC.

Experiments were performed on 15 rabbits of both sexes weighing

2,5 – 3,0 kg.

DIC syndrome is diagnosed by conventional methods. Dynamics marker enzyme acid phosphatase in the serum was studied using the method Bodansky. Activity in plasma was determined by factors granulocyte degree of reduction of the number of granules.

Studies indicate that an increase in the activity of acid phosphatase in serum corresponded to changes in the content of the relative number of degranulated granulocytes. This increase in dynamics and acid phosphatase activity of granulocytes in the blood corresponded to the degree of severity of the DIC and reaches a maximum at the stage of hipocoagulation.

Thus, increasing the content of acid phosphatase in the blood dynamics DIC may indicate the possible involvement in the pathogenesis of activated granulocytes hemostasis DIC.

Key words: acid phosphatase, DIC, granulocytes, hemostasis.

Стаття надійшла до редакції 19.05.2013 р. Прийнято до друку 26.06.2013 р. Рецензент – д. б. н., проф. І. О. Іванюра.

Материал взят из: Вісник Луганського національного університету імені Тараса Шевченка. Біологічні науки. № 19 (278)