ЦИТОКИНОВЫЙ СТАТУС ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ, СОЧЕТАННОМ С ХРОНИЧЕСКОЙ ОПИСТОРХОЗНОЙ ИНВАЗИЕЙ

Д. С. Гонсорунова, О. В. Елисеева, Е. Г. Белоногова

ГОУ ВПО СибГМУ Минздравсоцразвития России (г. Томск)

Введение. Исследование роли паразитарных инвазий при аллергическом воспалении является актуальным в связи с их способностью модифицировать иммунный ответ.

Цель: установить иммунологические особенности атопического дерматита (АД), протекающего на фоне хронической описторхозной инвазии.

Материал и методы. В исследование включены дети, страдающие АД (n=50) и АД, сочетан ным с хронической описторхозной инвазией (n=42). Диагноз АД верифицировали согласно рекомендациям Научнопрактической программы «Атопический дерматит и инфекции кожи у детей: диагностика, лечение и профилактика». Диагноз описторхозной инвазии верифицировали методом копро овоскопии и ПЦРанализа. Уровень цитокинов определяли в сыворотке периферической крови пациентов методом ИФА с использованием тест наборов (Вектор Бест, Новосибирск). Статистическая

обработка данных выполнена с использованием пакета прикладных программ ―Statistica for Windows

6.0‖.

Результаты. Согласно полученным данным, уровень ИЛ2, ИЛ10, ИФНγ статистически зна чимо преобладал в сыворотке крови у детей с АД на фоне хронической описторхозной инвазии в сравнении с изолированной формой АД (p<0,05). Напротив, более высокое содержание ИЛ4 зареги стрировано при изолированном течении АД (p<0,05). Установлена положительная корреляция уров ня ИЛ4, ИЛ5 с тяжестью болезни (r=0,66 и r=0,42 соответственно, p<0,05).

Заключение. Преобладание цитокинов Th1 профиля и низкие показатели Th2 интерлейкинов при АД, сочетанном с описторхозной инвазией, свидетельствует о модифицирующем влиянии описторхозной инвазии на иммунный ответ при аллергическом воспалении.

СЕКРЕЦИЯ ПАРАКРИННЫХ ФАКТОРОВ СТИМУЛИРОВАННЫМИ АНАЛОГОМ АДЕНОЗИНА ДЕНДРИТНЫМИ КЛЕТКАМИ ЧЕЛОВЕКА

К. В. Горемыкин, К. С. Юрьева, Ю. А. Яковлева, Е. В. Короткая, А. Э. Сазонов, С. В. Рыжов*

ГОУ ВПО СибГМУ Минздравсоцразвития России (г. Томск),

*Университет Вандербилта (г. Нэшвилл, США)

Введение. Дендритные клетки (ДК) играют значительную роль в патогенезе бронхиальной ас тмы (БА). Помимо фагоцитарной и антигенпредставляющей функции, ДК также участвуют в пара кринной регуляции, в частности, секретируют интерлейкин 6 (ИЛ6) и фактор роста сосудистого эн дотелия (VEGF) [1]. ИЛ6 имеет существенное значение в патогенезе БА, переключая лимфоцитар ный иммунный ответ с Тклеточного на Вклеточный, VEGF также оказывает большое влияние, уси ливая прорастание легочной ткани кровеносными сосудами и тем самым способствуя поддержанию воспаления [1].

Во время острой фазы воспаления моноциты периферической крови (ПК) мигрируют в ткань, где, в зависимости от микроокружения, происходит их активация. Направление дифференцировки

моноцитов – в макрофаги или же в ДК – зависит от влияния микроокружения. Как правило, моноциты дифференцируются в ДК в условиях гипоксии, воспаления или повреждения ткани. При вышепе речисленных условиях наблюдаются повышенные концентрации аденозина. Аденозин – эндогенный нуклеозид, промежуточный продукт пуринового метаболизма, осуществляющий свои эффекты по средством активации аденозиновых рецепторов четырех типов: A1, A2A, A2B и A3 [1].

Никогда ранее не производилась оценка влияния аденозина на уровни секреции ИЛ6 и VEGF в

дендритных клетках моноцитарного происхождения на начальном этапе дифференцировки. Изучение эффектов аденозина на паракринную активность дендритных клеток поспособствует пониманию мо лекулярных механизмов развития воспаления при бронхиальной астме.

Цель работы – изучение эффектов действия аденозина на продукцию ИЛ6 и VEGF дендрит ными клетками моноцитарного происхождения больных бронхиальной астмой и практически здоро вых людей на начальном этапе их дифференцировки.

Материал и методы. В исследовании приняли участие 13 больных тяжелой БА обследуемых (5 женщин и 8 мужчин) в возрасте от 18 до 50 лет, а также 14 практически здоровых доноров, сопос тавимых по полу и возрасту. Мононуклеарные клетки выделяли из 20 мл венозной крови обследуе мых методом градиентного центрифугирования с фиколлом (1,077 г/см3) («ПанЭко», Россия). Выде ление моноцитов из мононуклеарной фракции проводили с использованием двойного градиента плотности перколла (1,130 г/мл, pH 8,5–9,5, 25оС) («Sigma», США). Выделенные клетки ресуспенди ровали в полной питательной среде, стандартизируя их количество до 5,0 105 клеток/мл. Для направ ленной дифференцировки моноцитов в дендритные клетки культура выращивалась в полной среде в течение 38 часов. Половина культур выращивалась с добавлением 30 µM NECA (N этилкарбоксамидоаденозин, стабильный аналог аденозина). Для стимуляции дифференцировки не зрелых дендритных клеток в зрелые использовался липополисахарид (ЛПС). Определение спонтан ного и NECAстимулированного уровней ИЛ6 и VEGF в супернатантах проводили с использованием твердофазного иммуноферментного метода по инструкциям, предлагаемым производителями тест систем («Векторбест», Россия). Статистическую обработку производили в пакете программ SPSS

17.0.

Результаты и обсуждение. Результаты исследования приведены в таблице.

Таблица

Уровни продукции паракринных факторов (интерлейкина 6, фактора роста сосудистого эндотелия) в дендритных клетках больных бронхиальной астмой тяжелой степени, а также в группе практически здоровых людей, Me (Q1Q3)

Уровень продукции, нг/мл

ИЛ6

VEGF

Группа обследуемых с БА тяжелой степени

(n=13)

Контрольная

группа

(n=14)

Группа обследуемых с

БА тяжелой степени

(n=13)

Контрольная

группа

(n=14)

Базальный

5,67

(4,429,29)

4,06

(2,126,18)

0,016

(0,0110,337)

0,068

(0,0210,154)

Cтимулирова

нный NECA

5,53

(3,4610,72)

3,77

(2,346,26)

0,328

(0,0810,411)

#

0,275

(0,1460,562)

#

Примечания: БА – бронхиальная астма; контрольная группа – практически здоровые люди;

NECA – Nэтилкарбоксамидоаденозин (стабильный аналог аденозина);

# – различия при сравнении c базальным уровнем (без стимуляции NECA) статистически значимы при уровне p < 0,05;

Уровень секреции VEGF под действием NECA повышался как в группе больных бронхиальной астмой (в 20 раз), так и в группе практически здоровых людей (в 4 раза) (таблица). Данное наблюде ние соответствует мнению, что VEGF является одним из ранних паракринных факторов, высвобож дающихся под действием аденозина из предшественников ДК на раннем этапе их созревания [2]. При этом не наблюдалось статистически значимых различий между уровнями VEGF, произведенного ДК, полученными от здоровых людей, и полученными от страдающих БА людей. Стимуляция NECA не приводила к появлению различий по этому параметру (таблица).

Статистически значимого повышения уровня секреции ИЛ6 под действием NECA не происхо дило (таблица), как не наблюдалось и различий между уровнями продукции ИЛ6 ДК больных и здо ровых обследуемых. Из работ других авторов известно, что для начала синтеза ИЛ6 в ответ на дей ствие аденозина или же NECA требуется большее, чем 38 часов, время культивации ДК. Так, в работе Novitskiy et al. [2] секреция ИЛ6 наблюдалась после 5 суток культивации моноцитов в направлении ДК, при этом было отмечено многократное (примерно в 10 раз) усиление секреции под действием NECA.

Заключение. Впервые было проведено исследование по изучению эффектов действия аденози на на продукцию ИЛ6 и VEGF дендритными клетками моноцитарного происхождения больных бронхиальной астмой и практически здоровых людей на начальном этапе их дифференцировки. По казано, что под действием NECA «ранние» дендритные клетки секретируют повышенные количества VEGF, но не ИЛ6. Различий в уровне секреции «ранними» дендритными клетками как VEGF, так и ИЛ6 между здоровыми и больными астмой людьми не наблюдалось.

Список литературы:

1. Hasko G., Linden J., Cronstein B., Pacher P. Adenosine receptors: therapeutic aspects for inflammatory and immune diseases // Nature Rev Drug Discov. – 2008. – № 9. – P. 759770.

2. Novitskiy S. V., Ryzhov S., Zaynagetdinov R. Adenosine receptors in regulation of dendritic cell differentiation and function // Blood. – 2008. – V. 112, № 5. – P. 18221831.

Материал взят из: Науки о человеке: Сборник статей по материалам XII Российского конгресса молодых ученых с международным участием (Томск, 26-27 мая 2011 г.)